农杆菌介导Txpam基因转化烟曲霉TMS-26及其产紫杉醇效果评价

摘要：

为研究红豆杉紫杉醇合成途径限速酶基因功能及其对内生真菌烟曲霉TMS-26发酵产紫杉醇的影响,以曼地亚红豆杉愈伤组织制备cDNA作为模板扩增苯丙氨酸氨基变位酶基因(Txpam),构建重组质粒pGEX-4T-1-Txpam,转入大肠杆菌中进行异源诱导表达,经亲和层析纯化,获取重组酶TxPAM并验证其酶活性.构建pCAMBIA1302-Txpam质粒,转化农杆菌感受态细胞,利用农杆菌介导的转化体系获得转化子并优化转化条件,结合插入片段携带的分子标记和目的 基因进行转化子验证,同时培养转化菌株并检测紫杉醇产量.结果 表明:纯化获取的重组酶TxPAM,经HPLC检测具有将α-苯丙氨酸催化为β-苯丙氨酸的功能;在最优转化条件下,转化子数目达到471个/106个孢子;根据基因hyg和Txpam的克隆以及测序结果,说明成功构建了基因工程菌株,通过对其发酵条件进行优化,紫杉醇产量达到721.87μg/L.

关键词：曼地亚红豆杉Taxus×media;苯丙氨酸氨基变位酶;基因工程菌株;紫杉醇;发酵条件

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资助基金：陕西省2020年重点研发计划2020SF-318

在线出版日期：2021-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共15页

页码：2087-2101