ApoM+ HDL和ApoM-HDL的分离纯化及其与SR-BI的结合
目的 分离纯化载脂蛋白M阳性和阴性高密度脂蛋白(ApoM+ HDL和ApoM HDL),检测其与清道夫受体B类Ⅰ型(SR-BI)的结合能力.方法 采用腹水诱生的方法以重组人ApoM免疫小鼠制备小鼠抗人ApoM单克隆抗体.利用该抗体通过亲和层析的方法分离ApoM+ HDL和ApoM HDL,采用二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量方法对其定量分析.通过免疫共沉淀方法检测ApoM+ HDL和ApoM-HDL与巨噬细胞株THP-1细胞表面表达的SR-BI的相互作用.结果 经免疫、融合、筛选,获得4株特异性分泌ApoM单抗的杂交瘤细胞株,采用腹水诱生方案进行ApoM抗体的大量表达,获得浓度为1 mg/ml的ApoM单抗,在1∶4000稀释后仍能在25 kD处检测出目的蛋白.利用ApoM单抗进行亲和层析,分别收集流出液(ApoM-HDL)、洗脱液(ApoM+ HDL),洗脱液中能检测到ApoM,流出液中未检测到ApoM.经BCA蛋白定量ApoM-HDL浓度为3.23 mg/ml,ApoM+ HDL浓度为0.34 mg/ml.佛波酯处理THP-1细胞后表面SR-BI表达升高10％左右.免疫共沉淀结果显示,ApoM-HDL、ApoM+ HDL孵育组的总蛋白经SR-BI抗体沉淀的复合物中均能检测到SR-BI和HDL,重组人ApoM孵育组也能检测到SR-BI和ApoM.结论 小鼠抗人ApoM单抗具有良好的灵敏度和特异度,ApoM-HDL和ApoM+ HDL两种蛋白成分和重组人ApoM均能与THP-1细胞表面SR-BI结合.
载脂蛋白M、清道夫受体B类Ⅰ型
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R34(人体生物化学、分子生物学)
国家自然科学基金81201352、81370372;江苏省自然科学基金BK2012154、BK20130244;常州市应用基础研究项目CJ20122013
2016-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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