小鼠ORMDL3表达质粒的构建
目的 构建小鼠血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因的表达质粒,并在小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3细胞)中检测其过表达效果.方法 根据小鼠ORMDL3蛋白的编码序列设计引物,以NIH3T3细胞cDNA为模板,PCR扩增ORMDL3的编码序列,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ酶切位点之间,并测序鉴定.由脂质体介导将pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1-ORMDL3质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞中,24 h后收取细胞,抽取细胞全蛋白,Western blot检测ORMDL3蛋白的相对表达量.结果 成功构建小鼠ORMDL3表达质粒pcDNA3.1-ORMDL3.该质粒瞬时转染至NIH3T3细胞内可有效增加ORMDL3蛋白表达2倍左右(P＜0.05).结论 成功构建小鼠ORMDL3表达质粒,为后续小鼠动物模型研究ORMDL3基因的功能及致病机制提供依据.
血清类黏蛋白1样蛋白3、哮喘
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R725(儿科学)
国家自然科学基金30872804、81170661,教育部博士点基金20113234110010,江苏省研究生培养创新工程CXZZ11_0714
2015-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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