人miR-17-92cluster慢病毒载体构建及其在人脂肪细胞的表达验证
目的 构建人miR-17-92 cluster慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果.方法 以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR扩增包含miR-17-92 cluster所在区域上下游100 bp左右的基因组DNA,克隆入慢病毒表达载体,与Pcgvp、Rev、Vsvg包装质粒共转染HEK-293T细胞包装病毒,收取病毒上清液感染人脂肪细胞.36 h开始观察荧光标记,72 h收取细胞,抽提RNA,RT-PCR检测miR-17-92 cluster各miRNA及miR-103、let-7e的表达.结果 成功构建人miR-17-92 cluster慢病毒表达载体.包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到75％以上,miR-17-92 cluster各miRNA的过表达效率均达到2倍以上,且没有干扰miRNA内源性成熟机制.结论 成功构建了人miR-17-92 cluster慢病毒表达载体.包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现了该cluster的过表达效果,为研究人miR-17-92 cluster在人脂肪细胞中的功能提供参考.
miR-17-92cluster、慢病毒载体、人脂肪细胞
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R346(人体生物化学、分子生物学)
2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
624-627
