大鼠PPARγshRNA慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰慢病毒载体并鉴定.方法 设计针对PPARγ的小发夹RNA(shRNA)序列,应用基因重组技术插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒载体中,XbaⅠ和XhoⅠ双酶切和DNA测序鉴定重组克隆.将pLL3.7空载体(NC组)、pLL-PPARγ-sh1RNA(S1组)、pLL-PPARγ-sh2RNA(S2组)三组质粒分别与辅助包装质粒共转染人胚肾293T细胞,并测定病毒滴度;病毒感染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞和大鼠海马神经干细胞后,分别用RT-PCR和Western blot检测PPARγ mRNA和蛋白表达.结果 PPARγ shRNA成功插入慢病毒载体.慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度为5×106IU/ml.与NC组相比,S1、S2组PPARγmRNA水平下降(P＜0.05),且S1组PPARγ蛋白表达亦明显下降(P＜0.05).结论 成功构建PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体.

关键词：过氧化物酶体增殖激活受体γ、RNA干扰、慢病毒载体

所属期刊栏目：37

分类号：R587(内分泌腺疾病及代谢病)

在线出版日期：2011-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1528-1531