实时荧光定量PCR检测人组织因子及其剪切体方法的构建

摘要：

目的 建立检测人组织因子(flTF)及其剪切体(asTF)的实时荧光定量PCR检测技术.方法 分别采用文献报导及自行设计的检测人flTF和asTF的引物及TaqMan探针,经优化反应体系及反应条件后,用于检测人flTF和asTF基因.将扩增的人flTF和asTF的基因片段纯化后分别与pMD19-T载体连接,分别克隆构建含flTF和asTF基因片段的重组质粒,作为实时荧光定量PCR检测flTF和asTF基因表达的标准品.结果 PCR扩增产物分别经测序证实为flTF和asTF的特异性片段.本法检测flTF和asTF基因表达的灵敏度均为40拷贝/μl,线性范围均为4.00×101～4.00×107拷贝/μl,相关系数均为1.000;扩增效率分别为flTF 91.15%,asTF 90.53%,批间变异系数分别为flTF 3.04%～9.31%,asTF 3.01%～9.64%.结论 成功建立了检测人flTF和asTF的实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好,灵敏度高.

关键词：组织因子、剪切体、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：37

分类号：R446(诊断学)

资助基金：常州市卫生局指导性科技项目W2301011

在线出版日期：2011-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1507-1510