核酶体外切割肝癌多药耐药基因的研究

摘要：

目的利用核酶技术切割肿瘤多药耐药基因(MDR1),逆转肿瘤抗药性.方法针对人类MDR1mRNA第VⅡ外显子附近第179及196密码子的GUC序列,按照"锤头结构"模型设计、合成了两个核酶179MDR1 Ribozyme(179RZ)和196MDR1 Ribozyme(196RZ),并定向克隆入载体PGEM-3Zf(+)中.从肝癌多药耐药细胞株SMMC-7721/DOX中提取MDR1mRNA,RT-PCR法扩增出约269bp大小的特异性cDNA片段,采用SmaRT法克隆入载体PGEM-3Zf(+)中.在体外转录成RNA.结果通过测序证实重组质粒插入片断正确,在生理条件下,两个核酶均能定点切割MDR1mRNA成两段特定大小的片段.核酶的切割效率与作用时间、核酶与底物的比率、Mg2+浓度有关,196RZ的切割活性高于179RZ.结论核酶技术逆转肿瘤抗药性具有现实可能性.

关键词：多药耐药基因、核酶、基因克隆、逆转录-聚合酶链反应、SmaⅠ持续连接技术

所属期刊栏目：26

分类号：R73(肿瘤学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：24-26