基于CRISPR/Cas9系统建立DNA结合抑制因子3基因敲除人皮肤成纤维细胞系

摘要：

目的 利用CRISPR/Cas9技术建立转录因子DNA结合抑制因子3(ID3)稳定敲除的人皮肤成纤维细胞系(BJ-5ta),为研究ID3生物学功能提供细胞模型.方法 针对ID3基因的生物学特性设计3对小向导RNA(sgRNA),将其分别插入LentiCRISPR v2载体中,构建重组质粒;用构建的慢病毒载体感染BJ-5ta细胞,通过嘌呤霉素筛选获得ID3基因稳定敲除的BJ-5ta细胞系;利用T7核酸内切酶Ⅰ酶切实验和Western印迹实验检测ID3基因敲除效果;利用逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)实验检测ID3下游负调控基因转录产物的表达情况;利用CCK-8试剂盒检测敲除ID3基因对BJ-5ta细胞增殖的影响.结果 T7核酸内切酶Ⅰ酶切和Western印迹实验结果表明利用CRISPR/Cas9技术有效敲除BJ-5ta细胞ID3基因;RT-qPCR结果表明ID3基因敲除后其下游负调控基因转录产物表达上调;CCK-8实验结果表明ID3基因敲除对BJ-5ta细胞增殖无影响.结论 成功构建人源ID3基因敲除BJ-5ta细胞系,可为研究ID3调控机制和深入了解其在人皮肤成纤维细胞中的生物学功能提供细胞模型.

关键词：CRISPR/Cas9系统、DNA结合抑制因子3基因、基因敲除、细胞增殖

所属期刊栏目：47

分类号：Q78;Q753(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金81773755

在线出版日期：2023-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：493-499