肠致病性大肠杆菌效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性及泛素链连接方式的鉴定

摘要：

目的 鉴定肠致病性大肠杆菌(EPEC)效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性,检测其催化形成的泛素链的连接方式.方法 构建原核表达质粒,转化感受态细胞,表达纯化E2348C?1040蛋白质.通过体外泛素化实验鉴定其泛素连接酶活性,利用泛素赖氨酸位点突变蛋白结合Western印迹实验检测该分子催化形成的泛素链的连接位点.结果 成功构建原核表达质粒,获得纯度大于85％、浓度约为0.5 mg/ml的E2348C?1040蛋白质.分子水平的酶活实验结果表明E2348C?1040分子具有泛素连接酶活性,能催化形成不依赖于赖氨酸的泛素链.通过构建真核表达质粒转染HEK?293T细胞,发现E2348C?1040分子可在宿主细胞中催化形成甲硫氨酸(methionine 1,M1)连接的线性泛素链.结论 EPEC效应因子E2348C?1040具有泛素连接酶活性,能催化泛素形成M1连接的线性泛素链.这一发现将为揭示效应因子E2348C?1040在宿主细胞内的作用机制提供研究线索.

关键词：肠致病性大肠杆菌、效应因子、泛素化、泛素连接酶

所属期刊栏目：47

分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金82072251

在线出版日期：2023-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：182-187