靶向DNA连接酶Ⅳ小分子抑制剂SCR7提升CHO-K1细胞定点整合效率研究

摘要：

目的 应用DNA连接酶Ⅳ(Lig4)的小分子抑制剂SCR7处理中华仓鼠卵巢(CHO)-K1细胞,验证其能否提高CHO?K1细胞中由CRISPR/Cas9介导的外源基因在ROSA26安全位点的定点整合效率.方法 构建靶向CHO?K1细胞ROSA26位点的特异性pX330?sgRNA?ROSA26质粒以及带启动子失活的GFP报告基因同源打靶载体,摸索并确定SCR7在CHO?K1细胞内作用的适宜浓度及处理时间,通过流式细胞术检测SCR7对CHO?K1细胞定点整合效率,同时评价剂量范围内SCR7对细胞凋亡的影响.结果 在CHO?K1细胞中成功构建靶向ROSA26位点的GFP报告系统,该系统可用于验证CRISPR/Cas9介导的定点整合效率;确定了SCR7对CHO?K1细胞作用的合适剂量和处理时间,在该条件下SCR7对CHO?K1细胞无明显细胞毒性;证实了SCR7在剂量范围内能有效提升外源基因在CHO?K1细胞ROSA26位点的整合效率,且对细胞凋亡无明显影响.结论 SCR7能提升CHO?K1细胞定点整合效率,该发现为应用Lig4小分子抑制剂构建具备高效表达外源基因的重组CHO细胞系奠定了基础.

关键词：中华仓鼠卵巢细胞、DNA连接酶Ⅳ、SCR7、同源重组、CRISPR/Cas9、定点整合

所属期刊栏目：47

分类号：Q523(核酸)

资助基金：北京市自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：175-181,195