带荧光标签的产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白纯化及特性鉴定

摘要：

目的 表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(ETX),鉴定ETX的毒素特性.方法 在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜观察mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞和不同物种红细胞的结合情况.结果 成功表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,纯化后得到纯度较高的eGFP-ETX和mScarlet-ETX融合蛋白.通过细胞毒实验,证实eGFP-ETX毒素与未加荧光标签的His-ETX相比毒性减弱,mScarlet-ETX毒素与His-ETX毒性基本一致,确定了eGFP-ETX和mScarlet-ETX的最佳荧光值.将mScarlet-ETX应用于HaCaT细胞和HEKa细胞,观察到mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞结合,证实HaCaT细胞、HEKa细胞对ETX敏感.将mScarlet-ETX应用于人、小鼠和兔红细胞,mScarlet-ETX只与人红细胞结合.结论 mScarlet-ETX具有良好的毒素活性,可应用于对ETX毒性研究的多个方面.

关键词：产气荚膜梭菌、ε毒素、eGFP标签、mScarlet标签、融合蛋白

所属期刊栏目：46

分类号：R378.8(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金3197010267

在线出版日期：2022-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：744-748