实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RPA)快速检测鼠疫耶尔森菌

摘要：

目的 建立基于实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)的鼠疫耶尔森菌快速检测技术.方法 以鼠疫菌特异基因序列YPS723为靶标,设计实时荧光RPA引物探针并进行筛选;构建含有基因待检片段的重组质粒进行实时荧光RPA方法灵敏度的评价;将15种非鼠疫菌细菌基因组混合后进行实时荧光RPA方法特异性验证;将鼠疫菌基因组掺入人血清和小鼠全血中模拟自然感染状态,以评估实时荧光RPA检测的实用性.结果 筛选出的实时荧光RPA引物、探针在39℃条件下15 min内即可在便携装置上获得检测结果,最低检测模板质粒浓度为10拷贝/μl,与其他细菌无交叉反应且重复性良好.实时荧光RPA对人血清模拟样本和小鼠全血模拟样本中鼠疫菌基因组的检出限为50 fg/μl,且在模拟样本盲测中正确率达100％.结论 该研究开发了一种快速、便携、灵敏度高、特异性好的实时荧光RPA方法用于鼠疫菌的检测.

关键词：鼠疫耶尔森菌、实时荧光RPA、YPS723、检测

所属期刊栏目：46

分类号：Q93-331(微生物学)

在线出版日期：2022-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：487-492