携带Kpn1酶切位点的日本脑炎病毒全长感染性克隆的构建与鉴定

摘要：

目的 构建携带特定酶切位点的日本脑炎病毒全长感染性克隆,并对拯救病毒的生物学特征进行鉴定.方法 利用分子克隆和反向遗传学技术,在日本脑炎病毒全长感染性克隆pJE70质粒的基础上引入Kpn1单酶切位点,获得pJE70_Kpn1重组质粒.将质粒线性化后进行体外转录,将转录体RNA转染BHK-21细胞,拯救获得恢复病毒E70-Kpn1.通过间接免疫荧光、蚀斑形成实验、生长曲线测定、小鼠神经毒力评价等方法鉴定恢复病毒E70-Kpn1的生物学特性.结果 成功构建了携带Kpn1的日本脑炎病毒全长感染性克隆,该克隆能拯救出重组的日本脑炎病毒E70-Kpn1,其生物学特征与亲本株E70无显著差异.结论 研究获得携带Kpn1酶切位点的日本脑炎病毒全长感染性cDNA克隆,并成功拯救获得一株重组日本脑炎病毒,为下一步进行反向遗传学操作提供了可靠的工具.

关键词：脑炎病毒,日本;克隆,分子;pJE70质粒;Kpn1酶切位点;恢复病毒E70-Kpn1

所属期刊栏目：45

分类号：R373.31(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2022-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：908-912,918