epsin2蛋白质昆虫细胞纯化及液-液相分离功能探索
万方数据知识服务平台
应用市场
我的应用
会员HOT
万方期刊
×

点击收藏,不怕下次找不到~

@万方数据
会员HOT

期刊专题

10.7644/j.issn.1674-9960.2021.03.010

epsin2蛋白质昆虫细胞纯化及液-液相分离功能探索

引用
目的 利用昆虫杆状病毒表达系统得到epsin2蛋白质并进行纯化后,探索其能否在体外发生液-液相分离.方法 构建pmCherryCl-epsin2载体,在HeLa细胞内过表达后观察其胞内状态.构建pFastBac HT-B-mCherry-epsin2蛋白质纯化载体,转染昆虫细胞Sf9,获得His-mCherry-epsin2融合蛋白质.进一步探索epsin2蛋白质能否在体外发生液-液相分离以及不同蛋白质浓度、盐浓度等对其的影响.结果 PONDR数据库分析发现,epsin2C端有明显的低复杂无序区域.HeLa细胞内过表达pmCherryC 1-epsin2后发现epsin2蛋白质在细胞质呈点状聚集.pFastBac HT-B-mCherry-epsin2蛋白质纯化载体构建成功后,通过转染Sf9细胞获得His-mCherry-epsin2融合蛋白质.经过镍柱和快速蛋白质液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)纯化获得高纯度的His-mCherry-epsin2蛋白质,通过宽场荧光高分辨率活细胞成像系统观察发现mCherry-epsin2蛋白质发生了浓度依赖的液-液相分离,且可受高盐及1,6-HD抑制.结论 成功纯化出His-mCherry-epsin2融合蛋白质并发现其在体外可以发生液-液相分离,为后续探索epsin2如何通过相分离参与网格蛋白介导内吞(clathrin-mediated endocytosis,CME)调节生理功能奠定了基础.

epsin2、网格蛋白、内吞、真核表达、蛋白质纯化、液-液相分离

45

S476.13(各种防治方法)

国家自然科学基金;国家自然科学基金

2021-06-22(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共6页

288-293

相关文献
评论
暂无封面信息
查看本期封面目录

军事医学

1674-9960

11-5950/R

45

2021,45(3)

相关作者
相关机构

专业内容知识聚合服务平台

国家重点研发计划“现代服务业共性关键技术研发及应用示范”重点专项“4.8专业内容知识聚合服务技术研发与创新服务示范”

国家重点研发计划资助 课题编号:2019YFB1406304
National Key R&D Program of China Grant No. 2019YFB1406304

©天津万方数据有限公司 津ICP备20003920号-1

信息网络传播视听节目许可证 许可证号:0108284

网络出版服务许可证:(总)网出证(京)字096号

违法和不良信息举报电话:4000115888    举报邮箱:problem@wanfangdata.com.cn

举报专区:https://www.12377.cn/

客服邮箱:op@wanfangdata.com.cn