人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达及纯化带GST标签的人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白E6AP,为研究泛素化修饰与多种疾病的机制关联提供实验基础.方法 以人卵巢文库为模板,利用PCR技术扩增E6AP编码序列,将其插入pGEX?KG?GST载体中.利用DH5α感受态细胞鉴定重组质粒并大量克隆.质粒转入大肠杆菌Rossate菌株,小量诱导表达.利用GST融合蛋白纯化磁珠提取并纯化GST?E6AP融合蛋白,SDS?PAGE电泳和Western印迹检测纯化效率.结果 PCR技术成功获取大小约为2559 bp的E6AP编码序列,与pGEX?KG?GST载体连接,双酶切鉴定及公司测序结果显示GST?E6AP载体构建成功.转入Rossate菌株后诱导质粒小量表达,获取并提纯带有GST标签的E6AP重组蛋白.SDS?PAGE电泳和Western印迹结果显示E6AP蛋白纯化成功.结论 成功构建重组质粒并表达GST?E6AP蛋白,获取纯化E6AP蛋白,为进一步研究泛素化在疾病发生发展中的地位和作用奠定坚实基础.

关键词：人E6AP基因、人类乳头状瘤病毒相关蛋白、原核表达、纯化、泛素化

所属期刊栏目：43

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81773135;北京科学技术委员会生物医药与生命科学创新培育研究Z171100000417023

在线出版日期：2019-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：352-356