带Flag标签的Sirt4真核表达载体的构建及功能验证

摘要：

目的 构建带Flag标签pcDNA3.0载体的Sirt4真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞HepG2生长之间的关系.方法 以人卵巢文库为模板,采用PCR技术扩增出Sirt4的CDS区编码序列,将PCR产物插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞提取质粒,测序正确后将pcDNA3.0-Flag和pcDNA3.0-Flag-Sirt4分别转染肝癌细胞HepG2,Western印迹实验鉴定目的基因蛋白表达,CCK-8法、克隆形成实验测定其对肝癌细胞HepG2生长的影响,Transwell证明Sirt4对肝癌细胞HepG2体外侵袭能力的影响.结果 双酶切结果显示,pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功;Western印迹实验验证该基因蛋白成功表达;CCK-8法和克隆形成实验证明过表达Sirt4基因抑制HepG2细胞增殖,Transwell证明过表达Sirt4明显抑制HepG2细胞体外侵袭能力.结论 pcDNA3.0-Flag-Sirt4真核表达载体构建成功,过表达Sirt4基因可抑制肝癌细胞增殖及体外侵袭能力,为进一步研究Sirt4在肝癌中的发生与发展奠定了基础.

关键词：肝肿瘤、HepG2、pcDNA3.0-Flag-Sirt4、细胞增殖、质粒、转染

所属期刊栏目：43

分类号：R735.7;R446.62(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81672602;国家自然科学基金优秀青年科学基金项目81822037;全军后勤科研计划重点项目BWS16J010

在线出版日期：2019-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：37-41