A型肉毒毒素鼠源中和单抗的制备与鉴定

摘要：

目的 制备并鉴定A型肉毒毒素(BoNT/A)鼠源中和单克隆抗体.方法 利用BoNT/AHc抗原免疫小鼠筛选得到的55株杂交瘤细胞培养上清,通过小鼠中和实验(MNA)选出中和活性较高单抗,进行抗体分型并扩增抗体可变区基因;利用BALB/c小鼠制备腹水,通过辛酸-硫酸铵以及Protein-G亲和层析纯化,并进行ELISA、SDS-PAGE、Western印迹、截短实验、BIAcore、中和活性及中和剂量分析.结果 筛选得到1株中和活性较高的小鼠单抗BAS51,其轻链为κ、重链为IgG1,获得轻、重链可变区序列;小鼠腹水效价为7.29×105,纯化抗体纯度>95％;BAS51与抗原BoNT/AHC亲和力常数为1.53×109 L/mol,可与HCC片段结合,为线性表位,中和活性为100 LD50/mg,中和剂量为66.7 LD50/mg.结论 得到1株具有较强中和活性的抗BoNT/A小鼠源单抗,为A型肉毒毒素中和抗体的研发奠定了基础.

关键词：肉毒杆菌毒素、A型、抗体、单克隆、中和试验、杂交瘤

所属期刊栏目：42

分类号：R392

资助基金：国家科技重大专项资助项目2018X09J18105-003

在线出版日期：2019-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：689-693