人β-防御素3与结缔组织生长因子共表达重组慢病毒载体的构建及表达

摘要：

目的：体外构建共表达人β-防御素3（hBD3）与结缔组织生长因子（CTGF）的重组慢病毒，并检测其对骨髓间充质干细胞（BMSC）的转染效率及表达情况。方法体外构建携带hBD3、CTGF和增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组慢病毒表达载体，测定病毒滴度。转染BMSC，确定最适感染倍数（MOI）值。采用荧光显微镜和流式细胞仪检测病毒的转染效率及传代稳定性。 Western印迹检测目的蛋白的表达。结果经PCR和测序分析鉴定，成功构建了携带hBD3和CTGF基因的重组慢病毒载体Lenti-CTGF-hBD3-EGFP、Lenti-hBD3-EGFP和Lenti-EGFP，检测病毒滴度分别为3．21×108、5．80×108和1．16×109。病毒转染BMSC最适MOI值为150。荧光显微镜下，转染后BMSC绿色荧光效率高；流式细胞仪检测病毒的转染效率，Lenti-CTGF-hBD3-EGFP为79．72％，Lenti-hBD3-EGFP为83．08％，Lenti-EGFP为84．43％，且都稳定遗传。 Western印迹显示目的蛋白表达成功。结论成功构建了共表达hBD3、CTGF的重组慢病毒载体，并能在BMSC中高效、稳定表达，为进一步研究hBD3与CTGF的应用奠定了基础。

关键词：重组慢病毒、人β-防御素3、结缔组织生长因子、骨髓间充质干细胞

所属期刊栏目：41

分类号：Q78;R373(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2017-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：38-42