10.7644/j.issn.1674-9960.2016.10.005
串联杂种泛素结合结构域蛋白(ThUBD)在大肠杆菌中的可溶性高效表达
目的:提高人工串联杂种泛素结合结构域蛋白( tandem hybrid UBD, ThUBD)在大肠杆菌中的可溶性表达量,为泛素化蛋白研究提供高效特异的富集方法。方法根据大肠杆菌同义密码子相对频率( RFSC)表对大肠杆菌的密码子进行分类,计算ThUBD密码子的相对适应度,并根据分析结果对ThUBD的密码子进行优化;诱导表达和蛋白定量检测密码子的优化结果;亲和纯化及泛素化蛋白富集研究检测密码子优化后的ThUBD-S的UbC结合能力。结果根据分析结果优化ThUBD密码子,使得适于大肠杆菌基因表达的密码子从48%增加到75%,并消除了阻碍转录翻译的密码子,其密码子适应指数(CAI)从0.63升高到0.88。密码子优化后的ThUBD其可溶性蛋白ThUBD-S的表达量增加了4倍,达到总蛋白的13.06%。同时,优化后的ThUBD-S可能具有更高的UbC的结合能力。结论 ThUBD的基因序列经过优化后,其在大肠杆菌中的表达量升高4倍左右。同时,序列优化不影响融合蛋白ThUBD在大肠杆菌中的可溶性表达和结合UbC的能力。
ThUBD、泛素化蛋白、大肠杆菌、密码子优化、融合表达、蛋白质组学
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Q51(蛋白质)
国家重点研发计划资助项目2016YFA0501300;国家自然科学基金资助项目31670834;国家863计划资助项目2014AA020900,2014AA020607;北京市自然科学基金资助项目5152008;北京百名科技领军人才计划资助项目
2016-11-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共7页
795-800,818