单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响

摘要：

目的 研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响.方法 通过重组PCR方法将663位天冬氨酸突变为丙氨酸,构建Mps1激酶活性缺失的突变体(pcDNA3-Flag-Mps1 KD),并通过免疫印迹实验检测其是否能成功表达.采用免疫印迹实验检测Mps1及Mps1KD对PSMA7蛋白稳定性的影响;通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测Mps1及Mps1 KD对PSMA7 RNA表达水平的影响.结果 免疫印迹结果证实构建的突变质粒Mps1 KD能正确表达且野生型Mps1可明显增强PSMA7稳定性,而Mps 1KD则不能;加入Mps1激酶活性抑制剂后,降低PSMA7稳定性;RT-PCR检测结果发现Mps1及Mps1 KD对PSMA7RNA表达水平无影响.结论 成功构建了Mps1激酶活性缺失突变体真核表达质粒pcDNA3-Flag-Mps1 KD,并在293T细胞中得到了表达;研究还发现Mps1通过其激酶活性可增强PSMA7蛋白稳定性,但对其RNA表达水平无影响,为进一步研究Mps1对蛋白酶体功能影响及对肿瘤发生发展奠定基础.

关键词：单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)、蛋白酶体α7胡亚基(PSMA7)、蛋白酶体、稳定性

所属期刊栏目：40

分类号：Q556.9(酶)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81472497,81572620;山东省自然科学基金资助项目ZR2015HM003

在线出版日期：2016-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：392-395