10.7644/j.issn.1674-9960.2016.01.012
慢病毒介导的敲低E6 AP表达抑制胃癌细胞增殖和迁移
目的:构建稳定敲低E6AP表达的胃癌细胞BGC-823,并检测对胃癌细胞增殖和迁移等恶性生物学行为的影响。方法采用Western印迹方法检测E6AP在不同胃癌细胞系及胃正常黏膜上皮细胞系中的表达情况;将含有E6AP的慢病毒短发夹RNA( short hairpin RNA,shRNA)的干扰载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚肾293T细胞后,收集病毒上清感染胃癌细胞 BGC-823,经嘌罗霉素( puromycin)筛选后,获得慢病毒介导的E6AP shRNA的稳定表达细胞,用实时(real-time)PCR和Western印迹方法检测E6AP干扰效果;并利用细胞生长曲线实验、划痕愈合( wound healing)和Transwell实验检测E6AP shRNA对胃癌细胞增殖和迁移的影响。结果 E6AP在不同胃癌细胞系及胃正常黏膜上皮细胞系中均有表达;建立了稳定敲低 E6AP 的胃癌细胞 BGC-823;E6AP shRNA可有效抑制胃癌细胞增殖和迁移。结论 E6AP的生物学功能在胃癌恶性转化过程中发挥重要作用。
E6AP、慢病毒属、RNA干扰、胃肿瘤、细胞增殖
R735.2(肿瘤学)
国家自然科学基金资助项目81101883,81272231,31470773;北京市科技新星计划资助项目2009A38,2011112
2016-03-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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