IFN-λ真核表达载体的建立及其表达产物的生物学功能评估

摘要：

目的：构建 IFN-λ真核表达体系，检测 IFN-λ基因在真核细胞中的表达，评估真核细胞表达 IFN-λ的抗增殖和抗病毒生物学作用。方法从 poly I∶C 刺激的 HuH-7细胞 mRNA 中克隆 IFN-λ1／2基因全长，并进行 DNA 基因测序；构建 pcDNA3-IFN-λ1／2质粒，酶切鉴定，并将其转染 COS-7细胞，应用 Western 印迹检测 IFN-λ1／2在 COS-7细胞中的表达。COS-7细胞表达的 IFN-λ1／2作用于人食管癌 YES5和 T．Tn 细胞株，CCK-8法检测癌细胞增殖， Western 印迹检测凋亡蛋白 caspase-3的活化，实时荧光定量 PCR 检测 ISG15及 MxA 抗病毒基因表达。结果经PCR、DNA 测序和酶切鉴定，克隆的 IFN-λ1／2基因与 GenBank 公布的序列一致，IFN-λ1／2基因序列正确构建入pcDNA3载体中；在 pcDNA3-IFN-λ1／2转染的 COS-7细胞中检测到 IFN-λ1／2蛋白表达；其表达产物可诱导食管癌细胞增殖抑制、活化凋亡蛋白 caspase-3，并且上调抗病毒 ISG15及 MxA 基因。结论建立了 IFN-λ真核表达体系，即通过 pcDNA3-IFN-λ1／2转染 COS-7细胞实现了 IFN-λ表达；经此体系表达的 IFN-λ具有抗增殖、诱导凋亡及上调抗病毒基因表达的生物学作用；此体系的建立为 IFN-λ的生物学功能研究和临床应用奠定了基础。

关键词：IFN-λ、真核表达、抗增殖、凋亡、抗病毒

分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金资助项目81000913；河北省科学技术研究与发展计划资助项目10396101D；河北省科技计划资助项目13397703D；河北省应用基础研究计划重点基础研究项目14967719D，15962704D；河北省医学科研研究重点课题计划指导项目20150626

在线出版日期：2016-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：816-820