10.7644/j.issn.1674-9960.2015.10.004
肠出血性大肠杆菌O157∶H7Ⅲ型分泌系统效应蛋白NleF基因敲除菌株的构建及其生物学功能初探
目的:构建肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7 T3SS效应蛋白NleF敲除菌株和回复菌株,研究其对细菌生长和细胞死亡的影响。方法利用λ-Red同源重组的方法构建nleF基因敲除菌株ΔnleF;将pET-24a(+)-NleF重组质粒导入敲除菌感受态细胞中构建回复菌株ΔnleF/NleF。将野生株、敲除株和回复株分别用LB和DMEM(10%FBS)培养,每隔1 h测定D600,绘制生长曲线;分别用3种菌株感染HeLa细胞,用细胞毒性试剂盒检测上清中乳酸脱氢酶( LDH)的释放量,计算细胞毒性。结果成功构建NleF敲除菌株ΔnleF和回复菌株ΔnleF/NleF;野生株、敲除株和回复株三者的生长速率无明显差异;与野生株相比,ΔnleF感染HeLa细胞后,细胞毒性增加,ΔnleF/NleF感染后HeLa细胞毒性与野生株相当。结论 EHEC O157∶H7 T3SS 效应蛋白NleF对细菌的生长无明显影响,但可能抑制由细菌感染引起的宿主细胞死亡。
肠出血性大肠杆菌、O157∶H7、NleF、基因敲除、T3SS、λ-Red同源重组
R378.2(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
国家自然科学基金资助项目31400046
2015-11-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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