10.7644/j.issn.1674-9960.2015.09.007
鼠疫耶尔森菌Pla毒力蛋白的表达、纯化及其活性研究
目的:制备鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)重组纤溶酶原激活剂(Pla)蛋白,为研究鼠疫菌蛋白之间相互作用和鼠疫的免疫学诊断奠定基础。方法应用PCR从鼠疫菌基因组中扩增pla基因,将其克隆到pET28a表达载体中;转化大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达;SDS-PAGE电泳检测表达结果;应用8 mol/L尿素将包涵体变性,梯度稀释透析法将其复性,SDS-PAGE电泳和Western印迹检测目的蛋白;奶粉平板法检测纤溶酶原激活剂活性。结果与结论琼脂糖凝胶电泳和测序结果证明表达质粒构建成功;SDS-PAGE电泳结果表明Pla蛋白以包涵体形式表达,表达产物主要为目的蛋白,且目的蛋白的表达量较高;包涵体经变性、复性得到了电泳纯Pla蛋白,并具有纤溶酶原激活剂活性。该研究提供了一种简单、快速、高效制备具有活性的Pla蛋白的方法。
鼠疫耶尔森菌、纤维蛋白酶原激活剂、表达、纯化
Q71(生物大分子的结构和功能)
国家自然科学基金资助项目31430006,81171529;国家重点基础研究发展计划资助项目2014CB744405
2015-10-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
677-681,687