Poly（A）加尾-RNase H消化-RT-PCR法分析应激诱导生成5′端tRNA半分子

摘要：

目的：建立一种简便、快速检测应激诱导细胞生成的5′端转移RNA（ tRNA）半分子的方法。方法提取应激诱导细胞RNA，用poly（ A）加尾酶在RNA分子3′端加尾后，加入与待测tRNA的3′端部分序列互补的简并DNA探针杂交，经RNase H消化与DNA探针互补的tRNA序列，再由oligo（ dT） n锚定引物进行逆转录获得互补DNA（ cDNA），以5′端tRNA半分子和锚定引物的序列为PCR反应的上下游引物，PCR扩增检测5′端tRNA半分子。结果经poly（ A）加尾-RNaseH消化-RT-PCR-电泳等步骤，可以实现对5′端tRNA半分子的检测分析。结论 poly （ A）加尾-RNaseH消化-RT-PCR法的建立实现了5′端tRNA半分子的简便、快速检测分析，为tRNA半分子生物学功能研究和检测分析提供了工具。

关键词：RNA、转移、tRNA半分子、poly(A)加尾酶、逆转录聚合酶链反应、内切核酸酶类、RNase H、分析

分类号：Q522;Q503(核酸)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31070702，31270836；国家高技术研究发展计划资助项目2012AA022501

在线出版日期：2015-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：460-463