10.7644/j.issn.1674-9960.2015.06.009
H7 N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析
目的:利用毕赤酵母表达制备H7N9流感病毒血凝素[HA 1~525个氨基酸(aa)],并对其免疫原性进行研究。方法经全基因合成获得H7N9流感病毒[A/Hangzhou/1/2013(H7N9)]全长HA,以其为模板,PCR得到片段HA1-525,通过NspⅤ和NotⅠ双酶切连入pPICZαA载体,转入毕赤酵母X33,ELISA筛选阳性克隆。发酵培养后,表达上清经PEG20000沉淀获取HA1-525,并用糖苷内切酶H( endo H)酶切分析其N-糖链。将制备的HA1-525免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测特异性HA7抗体滴度,红细胞凝集抑制实验分析血抑活性。结果培养上清用抗HA7抗体经ELISA检测,重组菌成功表达HA7,且Western印迹检测发现有特异性弥散条带,经endo H 酶切后, HA1-525为均一条带,相对分子质量约58×103,与理论大小相当,表明HA1-525存在甘露糖基化结构。 HA1-525两次免疫小鼠后可产生1∶36000的抗体滴度。以H7N9裂解苗为抗原,检测其血抑活性为1∶700。结论利用毕赤酵母表达的H7N9流感病毒HA1-525可以诱导小鼠产生针对HA7的中和抗体。
H7 N9流感病毒、血凝素类、毕赤酵母、红细胞凝集抑制
R373.1(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
国家自然科学基金资助项目31200082;北京市自然科学基金资助项目7152112
2015-08-14(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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