10.7644/j.issn.1674-9960.2015.05.008
自杀质粒同源重组方法构建弗氏志贺菌htrA可控表达菌株
目的:构建弗氏志贺菌HtrA蛋白的可控表达菌株。方法构建自杀质粒同源重组载体,利用重组方法在基因组htrA前插入阿拉伯糖启动子,同时构建并导入外源表达AraC蛋白的表达载体,实现对HtrA蛋白的可控表达;在此基础上,通过蛋白印迹实验,检测诱导前后全菌以及周质中HtrA蛋白的表达情况。结果测序结果表明,自杀质粒同源重组载体以及外源表达载体构建成功;蛋白印迹实验结果显示,对比阿拉伯糖诱导菌株,未诱导菌株中基本未检测到HtrA蛋白的表达。结论自杀质粒同源重组方式可在无阿拉伯糖时有效阻遏HtrA蛋白的表达;同时在诱导后,还可恢复HtrA蛋白的正常表达,有利于后续功能研究。
志贺菌、弗氏、htrA基因、自杀质粒同源重组、阿拉伯糖操纵子、免疫印迹法
R378.25(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
国家自然科学基金资助项目81171531,81125012,81373316;国家973计划资助项目2011CB504901,2013CB910804
2015-06-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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