制备脆弱拟杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶单抗用于检测通用型红细胞中的微量残留酶

摘要：

目的：建立一种检测微量脆弱拟杆菌（ Bacteroides fragilis）来源的α-半乳糖苷酶的方法用于测定酶解转变的通用型红细胞上的残留酶。方法用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶（纯度大于90％）免疫BALB／c小鼠，制备单抗；用稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株制备腹水单抗，再经HiTrap rProtein A柱纯化获得高纯度的抗体；间接ELISA法测定单抗效价，Western 印迹法评价单抗特异性。联合纯化后的单抗和兔多抗采用间接ELISA法检测酶解法制备的通用型红细胞和洗涤液中的残留酶量。结果获得了高效价高纯度的单抗，Western 印迹实验显示该抗体可特异性地与新型α-半乳糖苷酶结合；间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng／ml，红细胞按1∶4的体积比经4次洗涤后，其残留酶量＜10 ng／ml。结论所建立的在血型转变过程中检测微量残留α-半乳糖苷酶的方法，可用于酶解法制备的通用型红细胞的安全性评价。

关键词：α-半乳糖苷酶、单克隆抗体、血型转变、通用型红细胞、残留酶检测

分类号：R457.11(治疗学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81300447

在线出版日期：2015-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：302-305