10.7644/j.issn.1674-9960.2015.02.010
核糖体蛋白RPS3 Ser209影响NF-κB转录活性及其与DNA结合能力
目的:构建人核糖体蛋白RPS3及其Ser209突变体的真核表达载体,初步探讨RPS3Ser209突变体对NF-κB转录活性及其DNA结合能力的影响。方法采用高保真PCR扩增RPS3的CDS序列,克隆入pcDNA-3.1myc-HisB载体,构建RPS3-myc表达载体。以构建成功的RPS3-myc质粒为模板,采用点突变方法构建RPS3Ser209突变体RPS3S209A-myc表达载体。报告基因实验检测RPS3及RPS3S209A对NF-κB转录活性的影响;共聚焦显微镜观察RPS3及RPS3S209A的细胞定位;EMSA 实验检测 RPS3及RPS3S209A的 DNA结合能力。结果成功构建RPS3-myc及RPS3S209A-myc真核表达载体,与野生型RPS3相比,RPS3S290A入核显著减少,其对NF-κB的激活显著降低,对NF-κB的DNA结合能力的影响显著下降。结论核糖体蛋白RPS3在NF-κB信号通路中的作用依赖于其第209位丝氨酸。
RPS3、NF-κB、转录活性、DNA结合
Q78(基因工程(遗传工程))
国家重大科学研究计划资助项目2013CB910804
2015-03-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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