10.7644/j.issn.1674-9960.2015.01.003
基于ERα-EGFP核颗粒形成的荧光成像分析快速识别环境中雌激素样物质
目的:利用基于荧光成像分析的细胞高内涵分析( high content analysis ,HCA)技术,建立快速识别环境中雌激素样物质的方法。方法以稳定表达雌激素受体α( ERα)-增强型绿色荧光蛋白( enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合蛋白(ERα-EGFP)的人骨肉瘤U2OS细胞为模型,以雌激素(17-β-雌二醇)为阳性对照药,以黄体酮为阴性对照药,基于ERα-EGFP核颗粒形成的荧光成像分析探查环境污染物质双酚A、壬基酚、邻苯二胺、对氨基苯酚、间苯二酚、间氨基苯酚、对苯二胺和甲基-2,5-二胺硫酸盐等对ERα-EGFP细胞核颗粒形成作用( Foci作用)的影响,分析其量效关系;并利用荧光素酶报告基因实验验证HCA的结果。结果 HCA结果显示,仅有双酚A、壬基酚和阳性药17-β-雌二醇能够剂量依赖地促进ERα-EGFP 细胞核颗粒形成作用,其EC50分别为(1.48±1.79)μmol/L、(3.70±0.78)μmol/L及(4.17±0.41) nmol/L,最小检出浓度分别为1 nmol/L(17-β-雌二醇)、300 nmol/L(双酚A和壬基酚);邻苯二胺、对氨基苯酚、间苯二酚、间氨基苯酚、对苯二胺和甲基-2,5-二胺硫酸盐等不能诱导ERα-EGFP细胞核颗粒形成作用。荧光素酶报告基因实验结果同样显示,活性药物双酚A、壬基酚和阳性药17-β-雌二醇能够剂量依赖地诱导ERα报告基因ERE-Luc的活性,其EC50分别为(2.31±0.21)μmol/L、(6.60±0.94)μmol/L及(4.46±0.56)nmol/L;最小检出浓度是3 nmol/L(17-β-雌二醇)、300 nmol/L(双酚A)和1μmol/L (壬基酚)。 HCA和荧光素酶报告基因实验的结果基本一致,但HCA方法更为灵敏,实验步骤更为简便。结论基于荧光成像定量分析的HCA技术能够快速和灵敏地识别具有ERα激动活性的环境物质,是分析环境雌激素的有效方法。受试化合物中双酚A和壬基酚有明确的ERα激动活性。
高内涵分析、雌激素受体α、细胞核颗粒形成、环境雌激素、转录活性
Q78(基因工程(遗传工程))
国家科技重大专项资助项目2009ZX09501-031,2012ZX09301003-003
2015-03-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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