10.7644/j.issn.1674-9960.2014.12.003
人CDK7基因真核表达载体的构建与鉴定
目的:构建带Myc标签的细胞周期蛋白依赖性激酶7(cyclin-dependent kinase 7, CDK7)的真核表达载体,获得其表达产物,并验证该激酶与已知相互作用蛋白P53之间的相互作用。方法应用PCR技术从人乳腺文库中扩增出CDK7全长编码区基因,将其克隆到pXJ-40载体中;继而重组质粒转染人胚肾293 T细胞,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达情况;免疫共沉淀检测Myc-CDK7与FLAG-p53的相互作用。结果双酶切和基因测序鉴定显示,Myc-CDK7真核表达质粒克隆构建成功;SDS-PAGE和Western印迹结果表明,Myc-CDK7转染人胚肾293T细胞后成功表达;免疫共沉淀显示,重组Myc-CDK7与已知相互作用蛋白P53在蛋白质水平上具有相互作用,证实其具有生物学活性。结论成功构建Myc-CDK7的真核表达载体,为进一步探讨Myc-CDK7对细胞周期的调控奠定了实验基础。
细胞周期蛋白质依赖激酶类、基因、p53、真核表达
Q786(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金资助项目31100604,81101387;北京市自然科学基金资助项目7132155
2015-01-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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