人白介素－6受体小分子拮抗剂高通量筛选模型的建立

摘要：

目的：建立新的白介素－6受体（ interleukin－6 receptor， IL－6R）小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL－6R胞外区基因，将其克隆至真核表达载体构建重组质粒pABHis－IL6R，瞬时转染HEK293T细胞进行分泌表达。利用Western 印迹实验、受体配体结合实验对表达产物进行活性验证。利用二者的相互作用以及Fc片段与酶标二抗结合的特性建立基于ELISA法的IL－6R拮抗剂筛选模型，并用Z′－因子检测与已知拮抗剂ab47215对该模型的稳定性与可靠性进行评估。结果成功构建了真核表达载体pABHis－IL6R，并对IL－6R进行了分泌表达。所表达的IL－6R能够被特异性抗体识别，能够与其配体rhIL－6特异性地结合，并表现出良好的量效关系。经测算得出，该模型的Z′－因子为0．53，满足高通量筛选的要求。 ab47215能够剂量依赖性地阻断IL－6R与其配体的结合，其IC50＝（0．55±0．11）μg／ml。结论建立了一种新颖而简便的IL－6R拮抗剂筛选模型，为寻找高效、低毒的小分子拮抗剂奠定了基础。

关键词：受体、白细胞介素6、拮抗剂、酶联免疫吸附测定、筛选模型

分类号：R593(全身性疾病)

资助基金：北京协和医学院博士生创新基金资助项目521005－31034

在线出版日期：2015-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：921-926