长效人白细胞介素4拮抗剂的研究

摘要：

目的：研制保留白细胞介素4受体（IL-4R）结合能力，但不具有激活下游信号活性的人白细胞介素4（IL-4）突变体M5，并通过抗体Fc融合延长其体内半衰期，为变态反应病药物研发提供基础。方法全基因合成人IL-4突变体M5，将其克隆到pBV220表达载体，在大肠杆菌DH5α中表达M5蛋白。同时构建嵌合基因M5-IgG1 Fc，并克隆到pPICZαA载体中，电转化糖基工程毕赤酵母GJK01，经甲醇诱导，分泌表达M5-IgG1 Fc融合蛋白。利用CTLL-2／IL-4R细胞测定纯化所得M5蛋白、M5-IgG1 Fc融合蛋白的IL-4拮抗活性，最后利用ELISA试剂盒检测比较两者在小鼠体内的清除速度。结果由大肠杆菌DH5α表达的M5蛋白和糖基工程酵母GJK01表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白都具有IL-4拮抗活性，它们在CTLL-2／IL-4R细胞上拮抗IL-4（5．6×10-2 nmol／ml）的EC50分别为（0．31±0．05）和（0．77±0．03）nmol／ml。小鼠体内M5蛋白在注射后0．5 h时达峰，其在血液中的含量为5．8×10－2 nmol／ml，而在2 h时血药浓度已下降为峰值的2．8％，在8 h时低于ELISA试剂盒的检测限。 M5-IgG1 Fc融合蛋白在注射后0．5 h时血液中浓度也达到峰值，为4．7×10－2 nmol／ml，120 h时其血药浓度下降为峰值的4．3％，而168 h时低于ELISA试剂盒的检测限。结论 M5蛋白具有IL-4拮抗作用。由糖基工程酵母表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白不仅具有IL-4拮抗活性，而且在小鼠体内具有较长的半衰期，为下一步将其研发为治疗变态反应病的药物提供了理论基础。

关键词：白细胞介素4、拮抗剂、毕赤酵母、融合蛋白、半衰期

分类号：R976(药品)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金资助项目31200082；国家863计划资助项目2012AA02A302

在线出版日期：2014-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：855-859