基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用

摘要：

目的：通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变，构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B，通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒（CMV）启动子，加入谷氨酰胺合成酶（ GS）基因筛选标志，再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切，插入人巨细胞病毒（hCMV）启动子，构建载体pHGS1．0。将目的基因分别插入载体pHGS1．0和pIRES2-EGFP中，通过比较重组蛋白TEM8（1-227）-VEGFR1domain2-IgG2（TV-IgG2）表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志，并加入hCMV启动子，人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现，重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选，得到高效表达目的蛋白载体系统，为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。

关键词：谷氨酰胺合成酶、甲氨喋呤、蛋氨酸亚氨基代砜、巨细胞病毒、高效表达细胞系、重组蛋白质类

分类号：Q2(细胞生物学)

资助基金：“重大新药创制”国家科技重大专项资助项目2011ZX09102-001-30，2012ZX09102301-001

在线出版日期：2014-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：807-810