肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的：构建肠出血性大肠杆菌（ EHEC） O157∶H7毒力蛋白nleB1基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备NleB1的抗血清。方法从EHEC O157∶H7 EDL933株的全基因组中PCR扩增出编码nleB1的990个碱基序列，构建原核表达载体pET24a-nleB1，将构建的重组表达载体的质粒pET24a-nleB1转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，利用异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白His-NleB1表达，并利用镍柱进行亲和层析纯化和切胶纯化，以纯化后的融合蛋白His-NleB1为抗原免疫BALB/c小鼠，获得抗血清。 Western印迹和ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建了pET24a-nleB1原核表达载体，纯化得到融合蛋白His-NleB1，进而免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，Western印迹和ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1的多克隆抗体，为研究EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB1的功能奠定了基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌、NleB1、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体

分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2014-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：799-802