蜘蛛牵引丝蛋白MaSp1原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

摘要：

目的：通过基因工程手段实现牵引丝关键组成蛋白MaSp1在大肠杆菌中的异源表达，并对其进行分离纯化，从而建立基因工程蜘蛛丝基因序列串联拼接、载体构建以及原核表达与纯化的关键技术体系。方法利用同尾酶连接法对合成的基因工程蜘蛛丝基因单体序列进行串联拼接，获得多倍串联体克隆重组子，将鉴定正确的多倍串联体克隆重组子与原核表达载体pET28a（＋）连接，转化至大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导其表达，表达产物通过SDS-PAGE和Western印迹进行鉴定。在此基础上对工程菌进行高密度发酵，所获蛋白通过硫酸铵分级分离方法进行纯化。结果与结论成功构建了基因工程蜘蛛丝MaSp1多串联体的表达载体，原核表达蛋白的相对分子质量与预期一致，且纯化的目的蛋白纯度达80％以上。上述研究工作为开展基因工程蜘蛛丝蛋白的规模化制备建立了关键技术方法，并为后续基因工程蜘蛛丝的人工纺丝提供必要的前提和工作基础。

关键词：MaSp1、基因工程、原核表达、蛋白质纯化

分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2014-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：621-625