线粒体内膜蛋白质mitofilin干涉慢病毒的构建及应用

摘要：

目的 构建线粒体内膜蛋白质mitofilin的慢病毒干涉载体,初步研究mitofilin在体内体外的生物学功能.方法 将靶向人mitofilin基因的短发夹RNA(shRNA)序列克隆到慢病毒核心质粒pSicoR中,瞬时转染HEK293T细胞筛选出有效的干涉片段,并进行慢病毒的包装.病毒感染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,Western印迹检测mitofilin蛋白的干涉效果.15 Gy γ射线照射刺激病毒感染的HeLa细胞,流式细胞术检测细胞凋亡.利用尾静脉大容量快速注射法将慢病毒注射入C57BL/6J小鼠体内,6.5 Gy γ射线照射刺激,蓝色温和电泳联合胶内酶活性染色分析,检测呼吸链复合体Ⅴ活性变化.结果 与结论成功构建具有mitofilin干涉效果的慢病毒干涉载体并获得了稳定干涉mitofilin的HeLa细胞株.构建的慢病毒能有效下调HeLa细胞和小鼠肝脏细胞mitofilin蛋白的表达.干涉mitofilin表达可增加γ射线诱导的细胞凋亡,降低γ射线刺激下小鼠肝细胞线粒体呼吸链复合体Ⅴ的活性.所构建的干涉慢病毒能够广泛应用于mitofilin在体内和体外的功能研究.

关键词：线粒体内膜蛋白、慢病毒、凋亡、线粒体、ATP合酶

所属期刊栏目：37

分类号：Q244;R373(细胞形态学)

资助基金：国家科技重大专项资助项目2009ZX09301-002

在线出版日期：2013-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：685-691