突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定

摘要：

目的 克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性.方法 根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因.将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3) Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定.结果 与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达.重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性.

关键词：囊泡相关膜蛋白质2、金属内肽酶、底物、原核表达

所属期刊栏目：37

分类号：Q51(蛋白质)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31201352

在线出版日期：2013-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：250-253