RNF185的克隆及过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

摘要：

目的 克隆RNF185全长基因,构建真核表达载体,检测其蛋白表达和亚细胞定位,并探讨RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.方法 TRIzol法提取人胚肾HEK293T细胞的总RNA,经RT-PCR反应扩增出RNF185基因,并通过酶切连接将其构建到真核表达载体pCMV-Myc和pEGFP-N1上,阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序.测序正确后抽提质粒作为模板扩增N端截短体,构建其真核表达载体.转染MC3T3-E1检测其蛋白表达及亚细胞定位情况.采用碱性磷酸酶染色法分析RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.结果 ①完成了RNF185的分子克隆,构建的真核表达载体pCMV-Myc-RNF185测序正确,所获得的序列与GenBank中收录的序列完全一致,N端截短体测序正确;②成功转染至MC3T3-E1细胞,蛋白相对分子质量大小与预期一致,全长形式定位于质膜;③RNF185及其N端截短体过表达均可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化.结论 RNF185过表达可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化.

关键词：环指结构域、泛素蛋白连接酶类、成骨细胞、细胞分化

所属期刊栏目：35

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2011-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：447-450