基于CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体的初步研究

摘要：

目的 利用CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体.方法 将质粒pcDNA3.1(+)的CMV启动子下游区域通过PCR技术替换成设计好的多克隆位点区,分别插入PCR合成的HdvRz核心序列和polyA尾片段,形成框架载体pc-H-A,通过瞬时转染HeLa细胞初步鉴定pc-H-A的可用性;用本室保存的CVB3(nancy株)感染HeLa细胞,取感染液上清提取病毒RNA,利用长链RT-PCR和长链PCR技术反复优化条件扩增病毒基因组全长片段,将此全长片段克隆至设计好的框架载体pc-H-A中,筛选阳性克隆,并对其进行测序鉴定.结果 与结论构建了带有CMV启动子的框架载体pc-H-A并初步鉴定了该载体可用,利用此框架载体构建了与基因库中序列相似性为99%的CVB3全长cDNA克隆pc-CVB3-H-A.该研究为进一步鉴定所构建的CVB3全长克隆的感染性提供了基础,并为后续在病毒学研究和基因治疗方面的研究提供了手段.

关键词：柯萨奇病毒、CVB3、感染性克隆、序列分析

所属期刊栏目：34

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2010-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：356-360