凋亡相关斑点样蛋白ASC真核表达质粒的构建及表达

摘要：

目的 构建凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)真核表达质粒.方法 从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得ASC的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-ASC.脂质体转染pcDNA3/flag-ASC质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达.同时用免疫沉淀和免疫印迹方法检测ASC蛋白与前半胱天冬酶(pro-caspase)-1的相互作用,并用ELISA方法检测ASC蛋白对IL-1β分泌的影响.结果 Western印迹实验证明pcDNA3/flag-ASC可以在HEK293T细胞中表达ASC,并且可以与pro-caspase-1结合,使IL-1β分泌明显降低.结论 构建了重组质粒pcDNA3/flag-ASC,在细胞中表达ASC后具有与pro-caspase-1结合的能力,并具有降低IL-1β分泌的生物活性.

关键词：凋亡调节蛋白质类、真核细胞、白细胞介素1β、质粒

所属期刊栏目：34

分类号：Q753(分子遗传学)

在线出版日期：2010-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：328-330,369