荧光定量PCR快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立

摘要：

目的 利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SAU)的方法.方法 根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC.用SAU 6538株污染饮用水和牛奶模拟实际样本,以评价体系的性能.结果 以含nuc片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度为5 拷贝/μl;以6538株基因组DNA为模板,最低检测限为10 fg/μl;用涂平板法计数并10倍梯度稀释的菌液提取DNA为模板,最低检测限为50 cfu/ml.建立的定量标准曲线的循环域值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r~2≥0.998),PCR效率E≥96.7%.用SAU 6538污染饮用水和牛奶模拟实际样本,灵敏度可达5×10~2 cfu/25 ml样本.结论 所建立的nuc-IAC荧光定量PCR具有内质控IAC,既能定量检测食物是否被污染,又能监测PCR体系,防止假阴性发生或低估病原菌污染量.

关键词：金黄色葡萄球菌、实时定量PCR、病原体检测、饮用水、牛奶

所属期刊栏目：34

分类号：R378.11(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技支撑计划2008BAK41B03

在线出版日期：2010-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：25-29,39