AFM观察胆碱类底物对AChE四聚体亚分子结构的影响

摘要：

目的:为探索乙酰胆碱酯酶(AChE)活性中心狭隙与其水解底物高效性相适应的可能机制,研究胆碱类底物对AChE四聚体(AChE G4)亚分子结构的影响.方法:冰浴超声法制备磷脂膜,囊泡融合技术将AChE重组到以云母为支撑的磷脂膜上,原子力显微技术(AFM)观察AChE分别与乙酰胆碱(ACh)和丁酰胆碱(BCh)作用前后的亚分子结构.结果:单个AChE G4颗粒是表面光滑、中间突出的椭圆形结构,亚基排列紧密,平均大小为[(89±7)nm×(68±9)nm×(6±3)nm,长×宽×高,n=100].与底物反应后,可清楚地看到亚基排列松散,酶蛋白是由4个亚基组成,亚基之间形成一个无阻碍空间,这与X线晶体学和分子动力学研究结果相一致.与S-ACh反应后,单个AChE G4颗粒平均大小为[(104±7)nm×(91±5)nm×(8±2)nm,长×宽×高,n=100],无阻碍空间大小为[(60±5)nm×(51±9)nm,长×宽,n=30];与S-BCh反应后,酶的大小为[(100±5)nm×(87±6)nm×(7±3)nm,长×宽×高,n=100],无阻碍空间大小为[(38±4)nm×(35±2)nm,长×宽,n=30].结论:胆碱类底物对AChE G4亚分子结构具有明显影响,酶亚分子结构变化与其水解底物的高效性是一致的.

关键词：乙酰胆碱酯酶四聚体、原子力显微技术、囊泡融合

所属期刊栏目：33

分类号：Q556(酶)

资助基金：国家重点基础研究计划"973"计划资助项目2006CB933304;国家高技术研究发展计划"863"计划资助项目2006AA03Z333;北京市科委重点计划项目D07010201160703

在线出版日期：2009-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：208-212