重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定

摘要：

目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白.方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-T easy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达.用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物.对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白.用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性.结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白.Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性.结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用.

关键词：瘦素、重组融合蛋白质类、大肠杆菌、低温、免疫活性、自诱导、表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：32

分类号：Q517(蛋白质)

在线出版日期：2009-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：443-446,451