TK基因慢病毒载体质粒的构建及慢病毒表达系统的建立

摘要：

目的:构建人单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的慢病毒载体质粒,并建立其慢病毒表达系统.方法:利用酶切分别获取目的基因TK片段及慢病毒pLenti6/V5载体片段,将目的基因插入载体相应酶切位点,构建pLenti6/V5-TK质粒.构建的重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定.利用慢病毒表达系统(ViraPowerTM Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包装系统质粒(pLP1,pLP2,pLP/VSVG) 4质粒共转染293T细胞,48 h后收集培养上清并感染大鼠胶质瘤细胞9L,抗稻瘟菌素(blasticidin, BSD)筛选9L/TK细胞.MTT方法测试更昔洛韦(ganciclovir GCV)对体外培养的9L/TK细胞杀伤效果.结果与结论:构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(transducing units,TU)/ml.经BDS筛选的9L/TK细胞对GCV杀伤敏感.成功构建了TK基因慢病毒载体质粒pLenti6/V5-TK,并建立了其慢病毒表达系统.

关键词：单纯疱疹病毒胸苷激酶基因、慢病毒载体、质粒、9L细胞

所属期刊栏目：31

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2007-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：334-337