实时荧光PCR法检测DPYD*9等位基因的单核苷酸突变

摘要：

目的:建立一种简便、特异的对二氢嘧啶脱氢酶基因DPYD*9进行等位基因分型的方法.方法:以DPYD基因为靶合成含突变位点的野生型引物WF、突变型引物TF和共同的下游引物R,用DNA荧光嵌入染料SYBR Green Ⅰ进行荧光PCR扩增,对产物进行溶解曲线分析以确定基因型;同时优化了引物浓度,分析其灵敏度并与普通PCR进行了比较,对20份PCR产物进行了验证.结果与结论:以野生型基因组为模板时,WF和R组合有荧光响应,而TF和R组合无荧光响应;当以突变型基因组为模板时,TF和R组合有荧光响应,而WF和R组合无荧光响应.两者Ct 值均为24,Tm值均为83oC.优化引物浓度为0.25 μmol/L,荧光PCR可分出10个模板拷贝数的基因型,而普通PCR只能区分模板为8.0×102拷贝数的基因型.PCR产物测序证实荧光PCR法与直接测序结果一致.该方法能准确快速地区分DPYD*9的基因型,敏感性和特异性强.

关键词：DPYD*9、单核苷酸多态性、实时PCR、基因分型

所属期刊栏目：30

分类号：R373.72(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2006-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：233-235,291