转移正相关基因mag-1的原核表达及抗体制备

摘要：

目的:克隆人mag-1基因,在大肠杆菌中进行表达并制备其抗体.方法:利用PCR方法从含有mag-1基因全长序列的pcDNA3-mag-1质粒上扩增mag-1基因开放阅读框(ORF),将其插入表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达载体pET-28a-mag-1,用IPTG诱导目的基因在E.coli中的表达,并通过Western印迹方法对表达产物进行鉴定.表达产物经过初步纯化后作为抗原免疫兔制备多克隆抗体.结果:所获得的序列经测序分析与源序列一致;SDS-PAGE分析表明,经0.1 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h后在E.coli中有大量的融合蛋白表达,相对分子质量约为18 ×103.Western印迹分析提示,诱导表达产物能与His单抗发生特异反应.ELISA结果表明获得了高效价的多克隆抗体.结论:获得了His-mag-1融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,并制备了其相应的多克隆抗体.

关键词：mag-1、基因表达、抗体、酶联免疫吸附测定

所属期刊栏目：30

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国科学院资助项目30470389;科技部科研项目2002CB513105

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：48-50