微丝相关蛋白hHBRK1突变体的构建、表达及纯化

摘要：

目的:构建微丝相关蛋白hHBRK1截短体和突变体原核表达载体,并表达及纯化融合蛋白.方法:采用常规PCR并结合定点突变技术,对hHBrk1基因进行缺失和点突变;利用限制性内切酶将PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-4T;IPTG诱导融合蛋白表达,通过谷胱甘肽-琼脂糖纯化技术分离纯化GST融合蛋白.结果与结论:构建了包括氨基端缺失截短体hHBRK1-ΔN、羧基端缺失截短体hHBRK1-ΔC和点突变蛋白hHBRK1-S56G57在内的原核表达质粒,分离获得较高纯度的重组hHBRK1突变体融合蛋白,Western杂交证实纯化蛋白为GST融合蛋白.本实验为进一步研究hHBRK1的相互作用蛋白及其可能的结合位点提供了基础.

关键词：hHBRK1、肌动蛋白类、基因突变、融合蛋白、微丝蛋白质类、聚合酶链反应

所属期刊栏目：29

分类号：Q754(分子遗传学)

资助基金：北京市自然科学基金5042023

在线出版日期：2006-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：528-530,553