新型重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白复性及纯化

摘要：

目的:对高效表达的重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白进行包涵体的分离、变性与复性以及纯化.方法:对表达菌体进行超声破碎、洗涤、氧化还原法变性及复性,经离子交换层析.结果:工程菌HB101/pE01T的表达产物是以包涵体形式存在,菌体的破碎以高渗蔗糖溶液进行预处理后,再超声破碎效果最好;包涵体的洗涤则先用Triton-X-100洗2次,再用8 mol/L尿素洗涤一次效果更优;最佳变性条件为在7 mol/L盐酸胍中加入 0.065 mmol/L的DTT和0.2 mol/L的盐酸精氨酸;最佳复性条件为在10℃复性保持24 h,蛋白浓度保持在30～ 80 μg/ml,并需加入0.2 mol/L盐酸精氨酸;利用谷胱甘肽的氧化还原法,当氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽的浓度比在 2∶ 1时所获得的活性成分得率最高;利用强弱离子交换结合的方法能获得纯度为95%的目的蛋白,所得融合蛋白可与IL-6及PEA抗体相结合并能特异性地杀伤高表达IL-6R的人多发性骨髓瘤细胞.结论:本研究获得重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白包涵体的分离、变性与复性条件和一条能获得大量高纯度该融合蛋白的纯化路线.

关键词：重组外毒素融合蛋白、IL-6 D24-PE40KDEL、包涵体、变性、复性、蛋白纯化

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金39500062,39870875

在线出版日期：2005-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：523-526