人细胞周期相关激酶(CCRK)启动子的分析和特征研究

摘要：

目的:分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子.方法:采用5′-RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点;对启动子区3′端3个截短片段255 bp(-367/-128),210 bp(-322/-128)和160 bp(-272/-128)进行删除分析,双荧光素酶分析测出的最小活性片段作为核心启动子的上游位点.通过生物软件MatInspector V2.2分析核心启动子区域,寻找并推测重要的转录因子,并对其核心序列进行定点突变分析,再通过电泳迁移率(EMSA)实验加以鉴定.结果:采用5′-RACE技术,得到的PCR产物直接测序,定位-242 "T"为转录起始点;通过启动子3′端小片段删除分析,255,210和160 bp均无活性,由此判断3′端255个核苷酸不存在核心启动子序列,并定位一段74 bp的区域为核心启动子(-441/-367)区域.通过MatInspector软件分析,发现在这段核心启动子区域内有3个重要的结合位点:Delta EF-1,NF-κB和Sp1.对这3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373,经双荧光素酶分析发现Delta EF-1的活性明显升高,NF-κB没有变化,Sp1的活性降低但不太明显.进一步通过电泳迁移率(EMSA)实验鉴定,Delta EF-1和NF-κB能与U373核蛋白形成特异性的DNA-蛋白质复合体,表明Delta EF-1和NF-κB两个转录因子与人CCRK基因表达相关.结论:对人CCRK启动子的特性研究,为今后认识该基因的转录调控机制打下了基础,为揭示恶性神经胶质瘤的发生机制及防治措施的研究提供了新的思路.

关键词：神经胶质瘤、细胞周期相关激酶、启动子、定点突变、转录因子

所属期刊栏目：28

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：437-441